Укр Рус
< Накази МОЗ

Наказ МОЗ № 4-a від 14.01.2015 ІНСТРУКЦІЯ щодо приготування та використання контрольних зразків для внутрішньолабораторного контролю якості досліджень

Наказ МОЗ № 4-a від 14.01.2015 ІНСТРУКЦІЯ щодо приготування та використання контрольних зразків для внутрішньолабораторного контролю якості досліджень

ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ Міністерства охорони
здоров’я України
14.01.2015  № 4





Зареєстровано в Міністерстві
юстиції України
30 січня 2015 р.
за № 113/26558


ІНСТРУКЦІЯ
щодо приготування та використання контрольних зразків для внутрішньолабораторного контролю якості досліджень

1. Ця Інструкція визначає порядок приготування та використання внутрішньолабораторного контрольного зразка (далі – ВКЗ).

2. У цій Інструкції наведені нижче скорочення вживаються у таких значеннях:

ВКЗ – внутрішньолабораторний контрольний зразок;

ІФА – імуноферментний аналіз;

КП – коефіцієнт позитивності;

CV – коефіцієнт варіації;

ОГ – оптична густина (англ. – optical dencity (OD));

ОГкрит (англ. – Cut off (CO)) – порогове (критичне) значення оптичної густини або оптичного сигналу.

3. Приготування ВКЗ здійснюється у декілька етапів:

1) підготовчий етап, який передбачає отримання достатньої кількості сироватки крові для приготування ВКЗ, включає:

а) приготування позитивного зразка сироватки крові, що включає приготування достатньої кількості матеріалу для роботи протягом півроку або року. Для цього беруть сироватку крові від одного пацієнта або суміш сироваток крові з високими значеннями ОГ, отриманих при дослідженні на наявність антитіл до ВІЛ за допомогою декількох наборів реагентів (тест-систем). При цьому матеріал не повинен містити серологічних маркерів збудників гепатитів В і С та антитіл до збудника сифілісу блідої трипонеми (Treponema pallidum).

З метою видалення преципітатів (часточок фібрину) матеріал необхідно центрифугувати при ~500g з подальшою фільтрацією (за необхідності).

Кожну порцію сироватки, отриману від ВІЛ-позитивної особи, заморожують при температурі мінус 20°С і зберігають в таких умовах до досягнення необхідного сумарного об’єму;

б) приготування негативного зразка сироватки крові, що включає приготування сироватки (або попередньо тромбінізованої/рекальцифікованої плазми крові людини), що не містить антитіл до ВІЛ 1/2, маркерів збудників гепатитів В і С та антитіл до збудника сифілісу блідої трипонеми (Treponema pallidum);

2) етапу приготування ВКЗ, який складається з:

а) приготування суміші сироваток:

індивідуальні зразки сироваток крові розморожують при кімнатній температурі.

Впевнившись у відсутності механічних домішок, бактеріального проросту та мутності, до чого призводить присутність ліпідів, об’єднують сироватки у відповідній ємності/посудині (одноразового застосування).

Ємність герметично закривають та ретельно перемішують шляхом багаторазового перевертання, не допускаючи утворення піни (бажане використання магнітної мішалки).

Аліквоту отриманої зливної сироватки додатково аналізують методом імунного блоту і після підтвердження позитивного результату використовують для підбору розведення. Частину, яка залишилася, зберігають у холодильнику при температурі плюс 4°С протягом часу, необхідного для підготовки ВКЗ;

б) підбору кінцевого розведення ВКЗ, що здійснюють шляхом визначення ОГ при аналізі методом ІФА в серії багаторазових поетапних розведень позитивного матеріалу (суміші сироваток) з інтервалом «2» (тобто у співвідношенні 1:1, наприклад 100:100 мкл). Для розведення використовують негативну сироватку. Процедуру розведення проводять безпосередньо в плашці, однорідності досягають шляхом багатократного піпетування.

Співвідношення ОГ контрольного зразка в кінцевому розведенні і критичного значення ОГ (ОГ/ОГкрит) повинно становити:

від 2,0 до 2,5 – для зразка ВКЗ з низьким вмістом антитіл до ВІЛ (такий ВКЗ доцільно використовувати для попередження хибно негативних та хибно позитивних результатів дослідження);

від 3,0 до 4,0 – для зразка ВКЗ, що містить антитіла до ВІЛ в більш високій концентрації.

Підготовлений зразок ВКЗ досліджують декілька разів методом ІФА (не менше 5 разів), визначають ОГ/ОГкрит і розраховують показники відтворюваності. Якщо CV не перевищує 10 %, зразок ВКЗ придатний до використання.

Для кожного найменування тест-систем готують окремі зразки ВКЗ.

4. Розрахунки об’ємів ВКЗ з необхідним кінцевим розведенням здійснюють відповідно до обсягів роботи лабораторій протягом 6 місяців за умови зберігання ВКЗ в порціях по 0,5-1,0 мл і використання протягом одного робочого дня. Після цього поетапно готують необхідний об’єм ВКЗ відповідно до наведеного нижче прикладу.

Приклад приготування 32 мл сироватки ВКЗ (1:128):

до 250 мкл позитивного матеріалу (суміші сироваток) необхідно додати 750 мкл негативної сироватки. Ретельно перемішати (20-30 разів). До приготованої таким чином суміші сироваток необхідно додати ще 7 мл негативної сироватки, після чого ретельно перемішати (20-30 разів). Отримані 8 мл розведеної позитивної сироватки необхідно розвести в 24 мл негативної сироватки та ретельно перемішати.

З метою запобігання нерівномірному розподіленню антитіл у ВКЗ та отримання  контрольних зразків з різною їх концентрацією не допускається одразу змішувати весь об’єм позитивної сироватки з негативною.

ВКЗ розливають у пластикові пробірки одноразового використання (типу «епендорф») з кришками, що закручуються, з розрахунку потреб на 1 день роботи лабораторії. Пробірки з ВКЗ маркують та зберігають протягом 6 місяців при температурі мінус 20°С та нижче.

При використанні ВКЗ допускається лише одноразове їх розморожування при кімнатній температурі з подальшим ретельним перемішуванням, використанням і зберіганням при температурі плюс 4°С протягом 24 годин. Надалі з ВКЗ поводяться так, як з досліджуваним зразком сироватки крові. Їх дослідження здійснюють у кожній тест-системі, що використовують в лабораторії.

Директор Департаменту
медичної допомоги


С. Хотіна

Інші НПА

Наказ МФУ №4 від 13.01.2015 Про затвердження форми Податкового розрахунку сум доходу, нарахованого (сплаченого) на користь фізичних осіб, і сум утриманого з них податку (форма № 1ДФ) та Порядку заповнення та подання податковими агентами Податкового розрахунку сум доходу, нарахованого (сплаченого) на користь фізичних осіб, і сум утриманого з них податку Наказ Мінмолодьспорт №67 від 17.01.2015 Про організацію навчально-тренувальної роботи дитячо-юнацьких спортивних шкіл Рішення НКЦПФР №1776 від 23.12.2014 Про внесення змін до Положення про порядок складання та подання адміністративних даних щодо діяльності торговців цінними паперами до Національної комісії з цінних паперів та фондового ринку Постанова НКРЕКП №13 від 23.12.2014 Про затвердження Процедури встановлення тарифів на послуги з централізованого постачання холодної води, водовідведення (з використанням внутрішньобудинкових систем) Рішення ГР при НБУ №5 від 07.10.2014 Щодо затвердження Перспективного (річного) плану роботи Громадської ради при Національному банку Наказ МОЗ №1141 від 21.12.2010 Про затвердження Порядку проведення тестування на ВІЛ-інфекцію та забезпечення якості досліджень, форм первинної облікової документації щодо тестування на ВІЛ-інфекцію, інструкцій щодо їх заповнення Наказ МОЗ №1141-a від 21.12.2010 Інструкція щодо заповнення форми первинної облікової документації N 498-11/0 Рішення НКЦПФР №1283 від 25.09.2012 Про затвердження Положення про порядок складання та подання адміністративних даних щодо діяльності торговців цінними паперами до Національної комісії з цінних паперів та фондового ринку Постанова КМУ №532 від 01.10.2014 Про внесення змін до постанови Кабінету Міністрів України від 1 червня 2011 р. № 869 Постанова ВРУ №163 від 05.02.2015 Про прийняття за основу проекту Закону України про внесення змін до Бюджетного кодексу України щодо запровадження нових інвестиційних можливостей, гарантування прав та законних інтересів суб’єктів підприємницької діяльності для проведення масштабної енергомодернізації